如何使用荧光分光光度计是一个很重要的问题，那么今天就让我们一起来了解一下具体该如何使用吧。
 

　　一、硬件操作
 

　　荧光分光光度计在使用时，需要注意开机次序，以保护设备之间不受影响。荧光光谱仪开机顺序一般为先开氙灯，然后开仪器主机，最后开跟仪器连接的计算机。
 

　　如此操作的原因在于稳态氙灯是高压点亮，为了避免瞬问脉冲电流对周围设备造成影响，需要先开氙灯，等电流稳定后再打开周边的电脑等设备。关机顺序则相反。
 

　　二、软件操作
 

　　荧光定量分析多采用工作曲线法，即以已知量的标准物质，按试样相同方法处理后，配成一系列标准溶液，测定其相对荧光强度和空白溶液的相对荧光强度;
 

　　扣除空白值后，以荧光强度为纵坐标，标准溶液浓度为横坐标，绘制工作曲线;然后将处理后的试样配成一定浓度的溶液，在同一条件下测定其相对荧光强度，扣除空白值后，从工作曲线上求出荧光物质的含量。
 

　　在用荧光分析法测定某些会引起荧光改变的微量物质时，常采用差示荧光法，可使荧光强度的读数差距拉大，使荧光强度的降低加大，从而提高方法的灵敏度和准确度。
 

　　下面以日立F-4500荧光分光光度计的使用为例，具体介绍如何在仪器上进图谱扫描、浓度分析等定性、定量测试操作。
 

　　1.图谱扫描(WavelengthScarl)简明操作：
 

　　①打开光谱仪电源开关(POwER)，5s后再按下氙灯点灯按钮，当氙灯点燃后，再接通主开关(MAIN)。此时主开关上方绿色指示灯连续闪动三下，然后开计算机、显示器、打印机。计算机进入操作系统。
 

　　②运行FL-Solution控制软件。
 

　　③建立试验方法(发射光谱)，设置测量参数：点击快捷栏“Method”后，立即显示了分析方法(AnalysisMethod)的五个重叠界面，分别为“常规”(Gen—eral)、“仪器条件”(Instnlinent)、“模拟画面”(Mmlitor)、“处理”(Processing)、“报告”(Report)。
 

　　下面详细介绍每个界面：单击“常规”按钮，测量方式选择波长扫描Wave一1ength);单击“仪器条件”按钮，扫描方式选为发射波长扫描。
 

　　激发波长的输入范围为200～900nm，发射起始波长的输入范围200～890nm，发射终止波长的输入范围210～900nm。选定合适的扫描速度、延迟时间、发射单元狭缝、光电倍增管负高压，设置发射单元狭缝、响应速度、重复次数等参数。
 

　　④进行样品扫描：将待测样品倒人四面通光的石英比色皿中，并将其放入仪器的样品架中。点击测量按钮，仪器便开始对样品进行扫描测量。
 

　　⑤存储扫描谱图：在文件菜单“另存为”，输入文件名，按“保存”将数据保存。
 

　　⑥打印谱图：打印样品扫描谱图。
 

　　⑦测试结束，将比色皿取出，清洗，晾干。退出软件，关闭计算机，在软件上将氙灯熄灭，待其冷却到室温时才关光谱仪主机。
 

　　注意：测试结束不要急于关闭光谱仪主机电源。务必等到氙灯冷却后，才关光谱仪主机。可以将手放在仪器主机上面左侧的散热窗口处，感受其温度，直到其温度降到室温时，才能关闭光谱仪主机。