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如何正确使用荧光分光光度计是一个很重要的问题
更新时间:2021-05-17   点击次数:826次
  如何使用荧光分光光度计是一个很重要的问题,那么今天就让我们一起来了解一下具体该如何使用吧。
 
  一、硬件操作
 
  荧光分光光度计在使用时,需要注意开机次序,以保护设备之间不受影响。荧光光谱仪开机顺序一般为先开氙灯,然后开仪器主机,最后开跟仪器连接的计算机。
 
  如此操作的原因在于稳态氙灯是高压点亮,为了避免瞬问脉冲电流对周围设备造成影响,需要先开氙灯,等电流稳定后再打开周边的电脑等设备。关机顺序则相反。
 
  二、软件操作
 
  荧光定量分析多采用工作曲线法,即以已知量的标准物质,按试样相同方法处理后,配成一系列标准溶液,测定其相对荧光强度和空白溶液的相对荧光强度;
 
  扣除空白值后,以荧光强度为纵坐标,标准溶液浓度为横坐标,绘制工作曲线;然后将处理后的试样配成一定浓度的溶液,在同一条件下测定其相对荧光强度,扣除空白值后,从工作曲线上求出荧光物质的含量。
 
  在用荧光分析法测定某些会引起荧光改变的微量物质时,常采用差示荧光法,可使荧光强度的读数差距拉大,使荧光强度的降低加大,从而提高方法的灵敏度和准确度。
 
  下面以日立F-4500荧光分光光度计的使用为例,具体介绍如何在仪器上进图谱扫描、浓度分析等定性、定量测试操作。
 
  1.图谱扫描(WavelengthScarl)简明操作:
 
  ①打开光谱仪电源开关(POwER),5s后再按下氙灯点灯按钮,当氙灯点燃后,再接通主开关(MAIN)。此时主开关上方绿色指示灯连续闪动三下,然后开计算机、显示器、打印机。计算机进入操作系统。
 
  ②运行FL-Solution控制软件。
 
  ③建立试验方法(发射光谱),设置测量参数:点击快捷栏“Method”后,立即显示了分析方法(AnalysisMethod)的五个重叠界面,分别为“常规”(Gen—eral)、“仪器条件”(Instnlinent)、“模拟画面”(Mmlitor)、“处理”(Processing)、“报告”(Report)。
 
  下面详细介绍每个界面:单击“常规”按钮,测量方式选择波长扫描Wave一1ength);单击“仪器条件”按钮,扫描方式选为发射波长扫描。
 
  激发波长的输入范围为200~900nm,发射起始波长的输入范围200~890nm,发射终止波长的输入范围210~900nm。选定合适的扫描速度、延迟时间、发射单元狭缝、光电倍增管负高压,设置发射单元狭缝、响应速度、重复次数等参数。
 
  ④进行样品扫描:将待测样品倒人四面通光的石英比色皿中,并将其放入仪器的样品架中。点击测量按钮,仪器便开始对样品进行扫描测量。
 
  ⑤存储扫描谱图:在文件菜单“另存为”,输入文件名,按“保存”将数据保存。
 
  ⑥打印谱图:打印样品扫描谱图。
 
  ⑦测试结束,将比色皿取出,清洗,晾干。退出软件,关闭计算机,在软件上将氙灯熄灭,待其冷却到室温时才关光谱仪主机。
 
  注意:测试结束不要急于关闭光谱仪主机电源。务必等到氙灯冷却后,才关光谱仪主机。可以将手放在仪器主机上面左侧的散热窗口处,感受其温度,直到其温度降到室温时,才能关闭光谱仪主机。
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